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方法一：使用Curve  Expert1.4軟件（點(diǎn)擊下載Curve  Expert1.4）

標準曲線(xiàn)的繪制 

可以采用各種繪圖軟件來(lái)繪制ELISA標準曲線(xiàn)，下面以“Curve  Expert1.4”軟件為例，繪制ELISA標準曲線(xiàn)的方法如下；

1．啟動(dòng)“Curve  Expert”

2．X軸輸入標準品的OD值（雙抗夾心輸入OD-空白值），Y軸輸入所對應的濃度值，如圖：

3．單擊[運行]  按鈕，出現如下對話(huà)框

4．單擊[ok]按鈕，出現如下兩個(gè)對話(huà)框，關(guān)閉下面一個(gè)對話(huà)框

5. 在對話(huà)框的右上角出現一些曲線(xiàn)的名稱(chēng)，從“1”開(kāi)始依次點(diǎn)擊曲線(xiàn)名稱(chēng)，在右下角會(huì )出現相應擬合的曲線(xiàn)。

（一般選擇第一個(gè)多項式擬合）

6. 根據擬合的曲線(xiàn)選取ELISA擬合度最佳的曲線(xiàn)雙擊，出現如下對話(huà)框：

注意：選擇系數（即“r”值）最好的曲線(xiàn)方程來(lái)進(jìn)行運算。在下面的對話(huà)框

右上角有“r”值 ，當“r”值越接近1擬合度越好

7．按[Ctrl]鍵+[L]鍵，出現如下對話(huà)框：

8．輸入標準的OD值，單擊[Calculate]按忸，即可得到待測蛋白的實(shí)際含量（標本稀釋了N倍，運算出的數值應在乘以N）。

9. 如想得到ELISA擬合曲線(xiàn)的方程，可在步驟6的對話(huà)框空白處右擊，選擇”Information”

10. 得到如下對話(huà)框：點(diǎn)擊“Copy”

在你需要的位置粘貼即可得到如下數據：

Rational Function: y=(a+bx)/(1+cx+dx^2)

Coefficient Data:

a =   -21.531017

b =  212.05019

c =  -0.24054479

d =  0.018060778

11. 修改作圖中X,Y坐標軸高度以及相關(guān)屬性

選擇步驟9所示圖中的第二排“Graph Properties”，修改好后點(diǎn)擊OK保存

方法二: 使用OriginPro 2021軟件計算競爭法試劑盒ELISA結果

第一步：我們以PG(Progesterone) ELISA Kit 這個(gè)試劑盒為例

將標曲的數據復制粘貼在如下表框中

按下Ctrl+A鍵全選然后鼠標依次單擊，Analysis---Fitting---Nonlinear Curve Fit---Open Dialog...

在Function Selection選項卡中，將 Category 參數設置為 Statistics

將Function參數設置為 Logistic

在Find X/Y選項卡中對 Find X from Y 進(jìn)行勾選，然后單擊 Fit 鍵

橫縱坐標選擇Log10參數，注意from / to 的上下限值的選擇，完成后單擊OK 鍵

最后結果計算，競爭法由于OD值與樣品濃度成反比關(guān)系，所以不需要減去零孔背景值，如果是夾心法的試劑盒，則還需要事先在excel中減去背景值然后再依據教程進(jìn)行計算。