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結果描述

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可能的原因

建議及預防措施

終止后,整板結果顯現均一的黃色或淡色;或標曲有線(xiàn)性但背景過(guò)高

整版發(fā)黃現象可能由于錯加其他試劑造成

實(shí)驗前檢查試劑的組分及批號,確認所有組分均屬于對應的試劑盒.不同試劑盒或不同批號

未充分清洗酶標板

確保清洗過(guò)程中每個(gè)微孔所加入洗滌液量一致.清洗完成后,將酶標板用力按壓在吸水紙上,以除去殘余的緩沖液.

孵育時(shí)間過(guò)長(cháng)

請嚴格按照說(shuō)明書(shū)步驟操作

酶標記物污染了吸頭及盛放顯色劑容器或陽(yáng)性對照污染了微孔

吸取不同的試劑時(shí)應更換吸頭,配置不同的試劑組分時(shí),應使用不同的儲存器皿,操作時(shí)請使用移液器

檢測抗體貨Avidin-HRP的濃度過(guò)高

檢查濃度計算是否正確或進(jìn)一步稀釋后再使用

底物在使用前曝光或污染

加入底物前,應始終避光保存

顯色時(shí)間過(guò)長(cháng)

請嚴格按照說(shuō)明書(shū)步驟操作

讀取了吸光值時(shí)使用了錯誤的濾光片

TMB為底物時(shí)應在450nm波長(cháng)讀取吸光值,并以650nm作為校正波長(cháng)

結果描述

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可能的原因

建議及預防措施

顯色步驟結束后,酶標板所有孔均無(wú)顏色;陽(yáng)性對照不明顯

組分試劑混淆使用

配制或使用時(shí)應看清楚標簽

洗版及加樣過(guò)程中,酶標物受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力

確認盛酶標的容器不含酶抑制劑(如NaN3等),確認配制洗液的容器已洗干凈.

遺漏了某種試劑或某個(gè)步驟

詳細審閱說(shuō)明書(shū),并嚴格遵循操作步驟

結果描述

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可能的原因

建議及預防措施

包括標曲、樣本在內的所有板孔顏色均較淡

試劑盒超過(guò)有效期或儲存不當

請在有效期內使用,并按照說(shuō)明書(shū)推薦的保存條件保存,避免污染

試劑、樣品用前未平衡

所有試劑、樣品應置室溫平衡30min左右

移液器吸量不足,移液抽吸排放太快,吸頭內壁掛液太多或內壁不清潔

校正移液器,吸頭要配套,每次吸頭要吻合緊密,移液不宜過(guò)快,排放應完全.吸頭內壁要清潔,最好一次性使用.

孵育反應時(shí)間不足

定時(shí)器準確定時(shí)

顯色反應不足

一般在15-30min

洗滌次數增加,濃縮洗液稀釋倍數不符合要求

減少洗滌沖擊力,按照說(shuō)明書(shū)要求稀釋濃縮洗液、洗滌時(shí)間,準確記錄洗滌次數及用量

蒸餾水水質(zhì)有問(wèn)題

配置好的洗液一定要檢測PH值是否呈中性

洗板及加樣過(guò)程中,酶標物受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力

確認盛酶標的容器不含酶抑制劑(如NaN3等),確認配制洗液的容器已經(jīng)洗干凈,確認配置洗液的純化水達到要求且未受污染.

標曲正常,樣本顯色較淡

樣本使用NaN3防腐劑,抑制了酶的反應

樣本不可使用NaN3

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待測樣本中可能不含強陽(yáng)性標本,故結果可能是正常的

如有懷疑,可以復檢

目測結果正常,但酶標儀讀值偏低

讀取吸光值時(shí)使用了錯誤的濾光片

TMB為底物時(shí)應在450nm波長(cháng)讀取吸光值,并以650nm作為校正波長(cháng)

結果描述

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可能的原因

建議及預防措施

重復性差

標準品配制有誤

嚴格按照說(shuō)明書(shū)標準品配制進(jìn)行操作,僅使用推薦的稀釋液對標準品進(jìn)行稀釋

試劑盒儲存方法不當或儲存環(huán)境太差

請在說(shuō)明書(shū)推薦的條件下保存,不要將重懸后的組分在室溫放置時(shí)間過(guò)長(cháng)

過(guò)早稀釋各工作組分

各工作組分請在使用前10分鐘配置,并立即加入到微孔中

樣本加入后未混勻

針對同時(shí)加入多種試劑組分,加樣后在混勻器上充分混勻,注意穩拿穩放,防止外濺

酶標儀測定重復性差

校準酶標儀

孵育時(shí)間、洗滌條件、顯色條件、操作人員不一致

重復測定標本,反應條件、人員等盡可能與上次保持一致

洗滌不正確

移液器準確加入200μl/孔洗滌液或注滿(mǎn)各孔,但不要溢出.洗板機洗板時(shí)不應有堵孔,洗滌應充分

孵育溫度恒溫效果不好

保持溫度恒定,避免局部溫度過(guò)高過(guò)低

加液時(shí),過(guò)多殘留于孔壁上

加液時(shí),吸頭在不碰到孔底的前提下盡量沿著(zhù)孔壁下方加液

耗材重復使用

吸取不同的試劑時(shí)應更換吸頭,配置不同的試劑組分時(shí),應使用不同的儲液器皿

微孔底部被劃傷或者存在污垢

操作時(shí)細心,注意不要觸碰底部擦拭酶標板底部,以去除污垢或者指紋

閾值附近時(shí)陰時(shí)陽(yáng)

同一樣品做3個(gè)復孔,以2個(gè)(含2個(gè)以上相同結果為準)

加樣時(shí)交叉污染

加標本時(shí)盡量避免交叉污染

出現隨機性的花板、跳孔現象

手工洗板造成的交叉污染

手工洗板時(shí)前3次注洗液后應立即棄去,后幾次再設定浸泡時(shí)間,可以減少交叉污染

拍板時(shí)交叉污染

拍板時(shí)用合適的吸水紙巾,不要把無(wú)關(guān)物質(zhì)拍進(jìn)板孔,并盡量不要在同一位置拍,以免交叉污染

洗板機加液頭堵塞導致加液不滿(mǎn)或吸液殘留量較大,造成花板、跳孔

疏通加液頭,使洗板時(shí)每孔均注滿(mǎn)洗液,吸液時(shí)殘留量要小

樣本離心處理不全,致使反應孔內發(fā)生凝血現象或存在沉淀物或殘留細胞成分干擾

血清血漿應充分離心,3000rpm 6min以上

樣品放置時(shí)間過(guò)長(cháng),污染

樣品應保持新鮮,或低溫保存,防止污染

洗滌液配制有誤或直接誤用濃縮洗滌液

請按說(shuō)明書(shū)配置