技術(shù)專(zhuān)欄
內參抗體怎么選
供稿：技術(shù)部
發(fā)布時(shí)間：2022-05-11
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內參抗體可用于評價(jià)蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western Blot)的效率，比較凝膠中每孔的蛋白上樣量。此類(lèi)對照可幫助確定樣品間表達水平的差異，以判斷是由細胞裂解物的實(shí)際蛋白水平導致，還是由上樣量的差異導致。
內參抗體主要功能
（1）檢測整個(gè)WB流程是否正常
（2）檢測基因表達產(chǎn)物是否正確
（3）比較產(chǎn)物微量的相對變化
（4）評價(jià)各個(gè)上樣孔內蛋白的總量是否基本一致
圖一示例
內參抗體在目標蛋白的免疫熒光研究中，也可以作為共染的陽(yáng)性對照。內參抗體分為未標記型和標記型，標記物包括生物素、HRP、FITC、PE、Cy染料和Alexa Fluor染料。
內參抗體種類(lèi)很多，比如β-actin、β-tubunlin、GAPDH、Vinculin、LaminB、PCNA等，對不同樣本選擇不一樣的內參抗體也是WB實(shí)驗成功的關(guān)鍵。本文將簡(jiǎn)單介紹選擇內參抗體應遵循的五項原則：
一、樣本種屬來(lái)源：
首先要考慮實(shí)驗樣本來(lái)源于什么物種。
1. 哺乳動(dòng)物的組織或者細胞樣本，通常選擇β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na,Katpase等。
2. 植物來(lái)源實(shí)驗樣本，則可以選擇plantactin、Rubisco等。
3. 其他來(lái)源樣本研究較少，所以就應該參照期刊文獻數據，選擇合適的蛋白作為內參。
二、分子量大?。?/strong>
選擇內參抗體時(shí)，應該考慮目的蛋白分子量的大小，一般保證目的蛋白與內參蛋白分子量相差5KD以上。例如，目的蛋白分子量為40KD，此時(shí)不適宜選擇β-actin、與GAPDH作為內參，可以考慮選擇α-Tubulin或者β-tubulin作為內參。
三、表達水平：
選擇的內參蛋白需要在待測樣本中是高表達的。常用的內參蛋白是由管家基因高表達的，是細胞發(fā)育和維持細胞活力所必須的。例如，細胞核的內參蛋白 PCNA，在 DNA S 期表達，因此對于非增殖細胞不推薦使用。
四、目的蛋白表達定位：
五、ELK Biotechnology可選相關(guān)內參：
| 適用范圍 | 名稱(chēng) | 貨號 | 分子量 |
| 胞質(zhì) | β-Tubulin | EM1114 | 50kDa |
| β-Actin | EM1031 | 43kDa | |
| α-Tubulin | EM1115 | 52kDa | |
| GAPDH | EM1028 | 37kDa | |
| Vinculin | ES3700 | 123kDa | |
| Cyclophilin B | EM1219 | 21kDa | |
| 核膜蛋白 | Lamin B | EM1035 | 68kDa |
| 核蛋白 | PCNA | EM1030 | 29kDa |
| TATA binding protein TBP/TBP | EM1216 | 38kDa | |
| YY1 | ES11233 | 45kDa | |
| HDAC1 | ES4225 | 55kDa | |
| Histone H3 | EM1037 | 15kDa | |
| 膜蛋白 | ATPase Na+/ K+ beta 2 (ATPB2) | / | 112kDa |
| 質(zhì)膜 | ATP1A1 (Sodium Potassium ATPase) | ES2892 | 100kDa |
| 線(xiàn)粒體 | COX4 | EM1032 | 15kDa |
| VDAC1 | ES4120 | 31kDa | |
|
全血 血漿 血清 |
Transferrin | EM1231 | 77kDa |
| Albumin | EM1190 | 66kDa | |
| 植物內參 | Plant actin | EM1147 | 43kDa |
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